一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)  GB15979-2002

前  言

本規(guī)范原文強(qiáng)制性

GB15979-1995《一次性使用環(huán)境衛(wèi)生 用具衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》自1996年公布至今，使制造業(yè)企業(yè)確立了衛(wèi)生要求和總體目標(biāo)，管理方法單位 也擁有監(jiān)管檢驗(yàn)根據(jù)，對(duì)促進(jìn)該領(lǐng)域的身心健康發(fā)展趨勢(shì)與環(huán)境衛(wèi)生水準(zhǔn)的提升發(fā)揮了主動(dòng)功效。此外，伴隨著產(chǎn)品品種與資料的發(fā)展趨勢(shì)，該規(guī)范有一些地區(qū)必須健全。因而明確提出修訂本規(guī)范。

本標(biāo)準(zhǔn)自執(zhí)行之日起替代GB1579-1995.

本規(guī)范的附則A至附錄G為規(guī)范的附則。

本規(guī)范由我國(guó)國(guó)家衛(wèi)生部明確提出。

本規(guī)范承擔(dān)擬定企業(yè)：上海疾病防治監(jiān)測(cè)中心；參與擬定企業(yè)：寶潔（我國(guó)）有限責(zé)任公司、強(qiáng)生（我國(guó)）有限責(zé)任公司。

本規(guī)范關(guān)鍵起草人：沈偉、盧敏、楊宏平、縝密、潘希和、劉育京。

我國(guó)國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

           一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)  GB15979-2002

Hygienic standard for disposable sanitary products    替代GB15979-1995

1、范疇

本標(biāo)準(zhǔn)了一次性使用衛(wèi)生用品的設(shè)備和工作環(huán)境衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)、消毒殺菌實(shí)際效果微生物檢測(cè)點(diǎn)評(píng)規(guī)范和相對(duì)應(yīng)檢測(cè)方式，及其原料與商品生產(chǎn)制造、消毒殺菌、存儲(chǔ)、運(yùn)送全過(guò)程衛(wèi)生要求和商品標(biāo)志規(guī)定。

在本規(guī)范中，一次性使用衛(wèi)生用品就是指：

本規(guī)范應(yīng)用與中國(guó)從業(yè)一次性使用衛(wèi)生用品的生產(chǎn)制造與售賣的單位、企業(yè)或本人，也適用經(jīng)銷商進(jìn)口一次性使用衛(wèi)生用品的單位、企業(yè)或本人。

2、引入規(guī)范

以下規(guī)范所包括的條款，根據(jù)在本規(guī)范中引入而組成為本規(guī)范的條款。本規(guī)范出版發(fā)行時(shí)，所顯示版本號(hào)均為合理。全部規(guī)范都是會(huì)被修定，應(yīng)用本規(guī)范的個(gè)方應(yīng)討論應(yīng)用以下規(guī)范最新版的概率。

GB 15981-1995    消毒與滅菌實(shí)際效果的評(píng)價(jià)方法與規(guī)范

3、界定

本規(guī)范使用以下界定。

一次性使用衛(wèi)生用品

應(yīng)用一次后即丟掉的、與身體同時(shí)或間接接觸的、并為做到人體系統(tǒng)環(huán)境衛(wèi)生或健康教育（抑菌或抗菌）目地而采用的各種各樣日常日常生活用品，商品特性可以是固態(tài)還可以使液態(tài)。例如，一次性使用手套或護(hù)指（包含衛(wèi)生護(hù)墊）、尿不濕等糞便衛(wèi)生用品（不包括走穩(wěn)紙巾等洗手間用紙）、安全套等，在本規(guī)范中統(tǒng)稱之為“衛(wèi)生用品”。

4、商品食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

4.1  外型務(wù)必干凈整潔，合乎該衛(wèi)生用品原有特性，不可有不正常氣味與臟東西。

4.2  不可對(duì)肌膚與黏膜造成異常刺激性與人民反映以及他危害功效。

4.3  商品須合乎表1中分子生物學(xué)指標(biāo)值。

表1

4.4  衛(wèi)生濕巾除務(wù)必做到表1中的分子生物學(xué)規(guī)范外，對(duì)大腸埃希菌和金黃葡萄球菌感染的消滅率須≥90%，如需標(biāo)出對(duì)細(xì)菌的功效，還須對(duì)白色念珠菌的根除率≥90%，其消菌在棚溫下最少須維持1年。

4.5  抑菌（或抗菌）商品出務(wù)必做到表1中的類似平級(jí)商品分子生物學(xué)規(guī)范外，對(duì)大腸埃希菌和金黃葡萄球菌感染的抗菌率須≥50%（溶出物性）或＞26%（非溶出性），如需標(biāo)出對(duì)細(xì)菌的功效， 還須白色念珠菌的抗菌率≥50%（溶出物性）或＞26%（非溶出性），其殺菌作用在棚溫下最少須維持1年。

4.6  一切經(jīng)環(huán)氧乙烷消毒殺菌的日用品在出廠時(shí)，環(huán)氧乙烷殘余量務(wù)必≤250ug/g。

5、工作環(huán)境食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

5.1  安裝與包裝棚空氣中細(xì)菌菌落數(shù)量應(yīng)≤2500cfu/m³.

5.2  操作臺(tái)表層細(xì)菌菌落數(shù)量應(yīng)≤20cfu/cm².

5.3  職工手表層細(xì)菌菌落數(shù)量應(yīng)≤300cfu/支手，并不可驗(yàn)出病原菌。

6、消毒殺菌實(shí)際效果微生物檢測(cè)點(diǎn)評(píng)

6.1  環(huán)氧乙烷消毒殺菌：對(duì)枯草桿菌灰黑色變異芽胞（ATCC 9372）的消滅指數(shù)值≥10³.

6.2  電磁波輻射消毒殺菌：對(duì)簡(jiǎn)短鏈球菌芽胞E6d（ATCC 27142）的消滅指數(shù)值應(yīng)≥10³.

6.3  工作壓力蒸汽消毒：對(duì)嗜熱人體脂肪鏈球菌（ATCC 7953）的消滅指數(shù)值應(yīng)≥10³.

7、測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)

7.1  商品測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)

7.1.1  商品外型：估測(cè)，應(yīng)合乎本規(guī)范3.1的要求。

7.1.2  商品毒理測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)：見(jiàn)附則A。

7.1.3  商品微生物檢驗(yàn)方式：見(jiàn)附則B。

7.1.4  商品除菌特性、抗菌特性與穩(wěn)定性測(cè)試方式：見(jiàn)附則C。

7.1.5  商品環(huán)氧乙烷殘余量測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)：見(jiàn)附則D。

7.2  工作環(huán)境取樣與測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)：見(jiàn)附則E。

7.3  消毒殺菌實(shí)際效果微生物檢測(cè)評(píng)價(jià)方法：見(jiàn)附則F。

8、原料衛(wèi)生要求

8.1  原材料應(yīng)無(wú)毒性、無(wú)害、零污染；原材料包裝應(yīng)清理，清晰說(shuō)明內(nèi)含物的名字、生產(chǎn)制造企業(yè)、生產(chǎn)制造日期或生產(chǎn)批號(hào)；危害環(huán)境衛(wèi)生醫(yī)治的與原材料應(yīng)不外露；有特殊要求的原材料應(yīng)標(biāo)明儲(chǔ)存情況和保存期。

8.2  對(duì)危害商品環(huán)境衛(wèi)生品質(zhì)的原材料應(yīng)該有相對(duì)應(yīng)檢測(cè)報(bào)告或證明文件，必需時(shí)要開(kāi)展微生物菌種監(jiān)管和采取有效對(duì)策。

8.3  嚴(yán)禁應(yīng)用廢舊的日用品作原材料或半成品加工。

9  工作環(huán)境與全過(guò)程衛(wèi)生要求

9.1  生產(chǎn)制造棚周邊環(huán)境應(yīng)干凈整潔，無(wú)廢棄物，無(wú)蚊、蠅等蟲害蚊蠅滋生。

9.2  生產(chǎn)制造棚應(yīng)該有充足室內(nèi)空間達(dá)到生產(chǎn)制造必須，合理布局一定要合乎生產(chǎn)工藝流程規(guī)定，切分有效，人、物分離，商品步驟中無(wú)反向與交叉式。原材料進(jìn)到與制成品出來(lái)應(yīng)該有污染治理對(duì)策和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)陌踩僮饕?guī)程，降低工作環(huán)境微生物菌種環(huán)境污染。

9.3  生產(chǎn)制造棚里應(yīng)配備合理的防污、防蛀、防鼠措施，路面、墻壁、設(shè)備工作臺(tái)應(yīng)整平、光潔、不起塵、有利于除灰與清理消毒殺菌，有足夠的燈具與室內(nèi)消毒或凈化處理對(duì)策，以確保工作環(huán)境達(dá)到本規(guī)范第5章的要求。

9.4  配備必不可少的制造和質(zhì)量檢測(cè)機(jī)器設(shè)備，有完善的制造和質(zhì)量檢測(cè)紀(jì)錄，進(jìn)一步確保商品環(huán)境衛(wèi)生品質(zhì)。

9.5  生產(chǎn)過(guò)程中用易燃性、易燃易爆物件或造成有害物的，必不可少具有相對(duì)應(yīng)安全性防護(hù)措施，合乎國(guó)家相關(guān) 規(guī)范或要求。

9.6  原材料和制成品應(yīng)單獨(dú)堆積，待檢、達(dá)標(biāo)、不過(guò)關(guān)原材料和制成品應(yīng)嚴(yán)苛分離堆積并設(shè)顯著標(biāo)示。庫(kù)房?jī)?nèi)要干躁、清理、自然通風(fēng)，設(shè)防蛀、防蠅設(shè)備和墊倉(cāng)板，合乎商品儲(chǔ)存標(biāo)準(zhǔn)。

9.7  進(jìn)到生產(chǎn)制造棚要跳槽衣和勞保鞋，戴工帽，直接接觸裸裝商品的工作人員需佩戴口罩，清理和消毒殺菌兩手或戴手套；生產(chǎn)制造棚前應(yīng)相對(duì)應(yīng)配有換衣棚、洗手臺(tái)、消毒池與緩存棚。

9.8  從業(yè)日用品生產(chǎn)制造的技術(shù)人員應(yīng)維持清潔衛(wèi)生，不可留手指甲，工作中時(shí)不能戴飾品，長(zhǎng)頭發(fā)應(yīng)卷在工帽內(nèi)。急性腸炎、副傷寒、慢性乙型肝炎、活動(dòng)性肺結(jié)核、尖銳濕疹、非淋及病毒性或滲出性皮膚疾病病人或醫(yī)院病毒攜帶者不可進(jìn)行立即與設(shè)備了解的制造主題活動(dòng)。

9.9  從業(yè)日用品生產(chǎn)制造的技術(shù)人員應(yīng)在入崗前及按時(shí)（每一年一次）開(kāi)展健康體檢與衛(wèi)生保健知識(shí)（包含生產(chǎn)制造環(huán)境衛(wèi)生、清潔衛(wèi)生、相關(guān)規(guī)范與標(biāo)準(zhǔn)）學(xué)習(xí)培訓(xùn)，錄取者即可入崗。

10、消毒殺菌全過(guò)程規(guī)定

10.1  消毒殺菌級(jí)商品最后消毒殺菌務(wù)必選用環(huán)氧乙烷、電磁波輻射或工作壓力蒸氣等合理消毒方法。常用消毒機(jī)務(wù)必滿足相關(guān)衛(wèi)生管理制度。

10.2  依據(jù)商品衛(wèi)生管理制度、 原始環(huán)境污染菌與消毒殺菌實(shí)際效果微生物檢測(cè)點(diǎn)評(píng)規(guī)范制訂消毒殺菌程序流程、性能參數(shù)、工作規(guī)范，工作經(jīng)驗(yàn)證后嚴(yán)格執(zhí)行即定的消毒殺菌加工工藝實(shí)際操作。該消毒殺菌程序流程、性能參數(shù)或危害消毒殺菌功效的原材料或生產(chǎn)工藝流程產(chǎn)生變化后應(yīng)再次認(rèn)證明確消毒殺菌加工工藝。

10.3  每一次消毒殺菌全過(guò)程需要開(kāi)展相對(duì)應(yīng)的加工工藝（物理學(xué)）和有機(jī)化學(xué)顯色劑檢測(cè)，每月用對(duì)應(yīng)的生物指示劑檢測(cè)，僅有當(dāng)加工工藝檢測(cè)、有機(jī)化學(xué)檢測(cè)、微生物檢測(cè)做到規(guī)范規(guī)定時(shí)，被消毒殺菌物件才可以在出廠。

10.4  商品經(jīng)殺菌處置后，外型與特性應(yīng)與消毒殺菌解決前無(wú)顯著看得見(jiàn)的差別。

11、包裝、運(yùn)送與存儲(chǔ)規(guī)定

11.1  實(shí)行日用品運(yùn)送或存儲(chǔ)的企業(yè)或本人，應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行經(jīng)營(yíng)者給予的運(yùn)送與存儲(chǔ)規(guī)定開(kāi)展運(yùn)送或存儲(chǔ)。

11.2  立即與產(chǎn)品觸碰的包裝材料務(wù)必?zé)o毒性、無(wú)害、清理，產(chǎn)品的全部包裝材料務(wù)必具備足夠的密封性和堅(jiān)固性以做到確保產(chǎn)品在正常情況下的運(yùn)送與貯存標(biāo)準(zhǔn)下不會(huì)受到環(huán)境污染的目地。

12、產(chǎn)品標(biāo)志規(guī)定

12.1  產(chǎn)品標(biāo)志應(yīng)滿足《我國(guó)產(chǎn)品質(zhì)量法》的要求，并在產(chǎn)品包裝上標(biāo)出實(shí)行的衛(wèi)生管理制度號(hào)及其生產(chǎn)制造日期和保存期（有效期限）或生產(chǎn)日期和限制應(yīng)用日期。

12.2  消毒殺菌級(jí)產(chǎn)品還應(yīng)在市場(chǎng)銷售包裝上標(biāo)明“消毒殺菌級(jí)”字眼及其消毒殺菌日期和有效期限或消毒殺菌生產(chǎn)批號(hào)和限制應(yīng)用日期，在運(yùn)送包裝上標(biāo)出“消毒殺菌級(jí)”字眼及其消毒殺菌企業(yè)與詳細(xì)地址、消毒方法、消毒殺菌日期和有效期限或消毒殺菌生產(chǎn)批號(hào)和限制應(yīng)用日期。

附  錄 A

（規(guī)范的附則）

產(chǎn)品毒理測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)

A1  各種產(chǎn)品毒理檢測(cè)指標(biāo)值

當(dāng)原料、生產(chǎn)工藝流程等產(chǎn)生變化很有可能危害產(chǎn)品毒副作用時(shí)，應(yīng)按表A1依據(jù)不一樣產(chǎn)品類型給予合理的（經(jīng)政府部門確認(rèn)的第三方）制成品毒結(jié)構(gòu)力學(xué)檢測(cè)報(bào)告。

表A1

A2  試驗(yàn)方法

皮膚刺激試驗(yàn)、正確引導(dǎo)黏膜刺激試驗(yàn)和皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)方法按國(guó)家衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》（第三版）第一手冊(cè)《實(shí)驗(yàn)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》（1999）中的“消毒液毒理實(shí)驗(yàn)技術(shù)性”中相對(duì)應(yīng)的試驗(yàn)方法開(kāi)展。

固態(tài)商品的試品制取方法依照A3開(kāi)展。

注

1、用以皮膚刺激試驗(yàn)中的空白試驗(yàn)應(yīng)是：鹽水和斑紙貼。

2、在皮膚變態(tài)反應(yīng)中，致敏物解決和激起解決使用的使用量保持一致。

A3  試品制取

A3.1  皮膚刺激試驗(yàn)和皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)

以橫斷面方法剪一塊斑貼尺寸的商品。針對(duì)干的商品，如尿不濕、女性生理期日用品，用鹽水濕潤(rùn)后貼住皮膚上，再用斑紙貼遮蓋。

A3.2  正確引導(dǎo)黏膜刺激試驗(yàn)

A3.2.1  干的商品（如女性生理期日用品）

以橫斷面方法裁取充足量的商品，按1g/10mL的比率添加殺菌鹽水，密封性于提純器皿中拌和后放置37℃±1℃下置放24h。制冷到棚溫，拌和后析抽樣液備檢。

A3.2.2  濕的商品（如衛(wèi)生濕巾）

在開(kāi)展陰道粘膜刺激試驗(yàn)的當(dāng)日，擠壓濕紙巾里的加上液做為試件。

A4  判斷規(guī)范

以國(guó)家衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》（第三版）第一手冊(cè)《試驗(yàn)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》（1999）中“毒理試驗(yàn)結(jié)果的最后判斷”的相對(duì)應(yīng)一部分做為試驗(yàn)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)。

附則B

（規(guī)范的附則）

商品微生物檢驗(yàn)方法

B1  商品收集與試品解決

于同一批號(hào)的三個(gè)運(yùn)送包裝中最少提取12個(gè)最少售賣包裝試品，1/4樣品用以檢驗(yàn)，1/4試品用以備用，另1/2試品（可就地保存）必需時(shí)用以復(fù)查。取樣的最少售賣包裝不應(yīng)該有開(kāi)裂，檢測(cè)前不可啟開(kāi)。

在100級(jí)凈化處理標(biāo)準(zhǔn)下用無(wú)菌檢測(cè)方式開(kāi)啟用以檢驗(yàn)的最少3個(gè)包裝，從每一個(gè)包裝中抽樣，精確稱量10g±1g試品。剪下來(lái)后添加到200mL殺菌生理鹽水中，充足攪拌，獲得一個(gè)生理鹽水樣液。液態(tài)商品用源液立即做樣液。

如被檢試品帶有很多吸水樹(shù)脂原材料而致使不可以吸出足夠樣液時(shí)，封閉液量可按每一次50mL增長(zhǎng)，直到能吸出足夠檢測(cè)用樣液。在預(yù)估細(xì)菌菌落數(shù)量與細(xì)菌菌數(shù)時(shí)相對(duì)應(yīng)調(diào)節(jié)稀釋液度。

B2  細(xì)菌菌落數(shù)量與原始環(huán)境污染菌檢驗(yàn)方式

本辦法適用商品原始環(huán)境污染菌與細(xì)菌菌落數(shù)量（下列通稱為細(xì)菌菌落數(shù)量）檢驗(yàn)。

B2.1  操作流程

待以上生理鹽水 樣液當(dāng)然地基沉降后取上清液做菌落計(jì)數(shù)。共注射5個(gè)培養(yǎng)皿，每一個(gè)培養(yǎng)皿中添加1mL樣液，隨后用制冷至45℃以內(nèi)的溶化的營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液15-20mL倒進(jìn)每一個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)混和勻稱。待瓊脂凝結(jié)后旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿置35℃±2℃塑造48h后，測(cè)算平板電腦上的菌體數(shù)。

B2.2  結(jié)果匯報(bào)

菌體呈塊狀生長(zhǎng)發(fā)育的平板電腦不適合選用；記數(shù)符合規(guī)定的板材上的菌體，按式（B1）數(shù)值：

式中：X₁――細(xì)菌菌落數(shù)量，cfu/g或cfu/mL；

      A――5塊瓊脂培養(yǎng)液版本上的細(xì)菌菌落數(shù)量；

      K――稀釋液度。

當(dāng)菌體數(shù)在100之內(nèi)，按實(shí)了解匯報(bào)，超過(guò)100時(shí)才有二位有效數(shù)字。

假如試品菌數(shù)超出本規(guī)范的要求，按B2.3開(kāi)展復(fù)查和結(jié)果匯報(bào)。

B2.3  復(fù)查方式

將存留的復(fù)查試品依前法進(jìn)行復(fù)測(cè)2次，2次結(jié)果均值都做到本規(guī)范的要求，則判斷被檢試品達(dá)標(biāo)；在其中有一切1次結(jié)果平均值超過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，則判定被檢樣品不合格。

B3  大腸桿菌檢驗(yàn)方式

B3.1  操作流程

抽樣液5mL，注射50mL乳清蛋白膽鹽發(fā)醇管，置35℃±2℃塑造24h，如不產(chǎn)酸都不脹氣，則匯報(bào)為大腸桿菌呈陰性。

如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則畫線注射伊紅美藍(lán)瓊脂平板電腦，置35℃±2℃塑造18-24h，觀查平板電腦上菌體形狀。典型性的大腸菌落為黑紫色或紅紫色，環(huán)形，邊沿齊整，表層光潔潮濕，常具備金屬質(zhì)感，也是有的呈黑紫色，沒(méi)有或有點(diǎn)金屬質(zhì)感，或淡粉色，核心較深的菌體。

取疑是菌體1-2個(gè)作革蘭氏染色鏡檢查，與此同時(shí)注射乳清蛋白發(fā)醇管，置35℃±2℃塑造24h，觀查脹氣狀況。

B3.2  結(jié)果匯報(bào)

凡乳清蛋白膽鹽發(fā)醇管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，乳清蛋白發(fā)醇管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，在伊紅美藍(lán)平板電腦上面有典型性大腸菌落，革蘭氏染色為呈陰性無(wú)芽孢桿菌，可匯報(bào)被檢樣品驗(yàn)出大腸埃希菌。

B4  銅綠假單胞菌檢驗(yàn)方式

B4.1  操作流程

抽樣液5mL，添加到50mL SCDLP栽培基質(zhì)中，充足攪拌，置35℃±2℃塑造18-24h。若有銅綠假單胞菌生長(zhǎng)發(fā)育，栽培基質(zhì)表層展現(xiàn)一層薄菌膜，栽培基質(zhì)常呈淺綠色或深藍(lán)色。從栽培基質(zhì)的薄菌膜處挑菌塑造物，畫線注射十六烷三丙基溴化銨瓊脂平板電腦，置35℃±2℃塑造18-24h，觀查菌體特點(diǎn)。銅綠假單胞菌在這里培養(yǎng)液上生長(zhǎng)發(fā)育優(yōu)良，菌體平扁，邊沿不齊，菌體周邊培養(yǎng)液有點(diǎn)淡粉色，別的菌不久。

取異常菌體玻片作革蘭氏染色，鏡檢查為革蘭氏陰性菌者應(yīng)開(kāi)展以下實(shí)驗(yàn)。

氧化酶試驗(yàn)：取一小塊清潔的乳白色過(guò)濾紙片放到殺菌培養(yǎng)皿內(nèi)，用無(wú)菌檢測(cè)玻棒挑菌異常菌體涂在過(guò)濾紙上面，隨后在其上滴入一滴新配置的1%二甲基對(duì)苯二胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，30s內(nèi)發(fā)生粉色或暗紫色，為氧化酶實(shí)驗(yàn)呈陽(yáng)性，不掉色者為呈陰性。

綠膿菌素實(shí)驗(yàn)：取2-3個(gè)異常菌體，各自注射在綠膿菌素測(cè)量用培養(yǎng)液斜坡，35℃±2℃塑造24h，添加三氯甲烷3-5mL，充足震蕩使塑造物中也許具有的綠膿菌素融解，待三氯甲烷呈深藍(lán)色時(shí)，用塑料吸管移到另一試管嬰兒中并添加1mol/L的硫酸1mL，震蕩后靜置一會(huì)兒。如頂層發(fā)生粉色或暗紫色即是呈陽(yáng)性，表明有綠膿菌素存有。

附錄C

（規(guī)范的附錄）

商品除菌性能、抗菌性能與穩(wěn)定性測(cè)試方式

C1  試品收集

為使試品具備較好的象征性，應(yīng)當(dāng)同一批號(hào)三個(gè)運(yùn)送包裝中最少隨機(jī)抽取20件最小售賣包裝試品，在其中5件備用，5件做抗菌或除菌性能檢測(cè)，10件做穩(wěn)定性測(cè)試。

C2  實(shí)驗(yàn)菌與菌液制取

C2.1  實(shí)驗(yàn)菌

C2.1.1  病菌：橙黃色金黃葡萄球菌（ATCC 6538），大腸埃希菌（8099或ATCC 25922）。

C2.1.2  酵母：白色念珠菌（ATCC 10231）

菌液制取：取菌種第3-14代的營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液斜坡新鮮塑造物（18-24h），用5mL 0.03mol/L磷酸鹽緩沖液（一下通稱PBS）洗下菌苔，使菌飄浮勻稱后用以上PBS稀釋液至所需濃度值。

C3  除菌性能實(shí)驗(yàn)方式

該實(shí)驗(yàn)抽樣位置，依據(jù)被試商品經(jīng)營(yíng)者的表明而明確。

C3.1  還原劑評(píng)定實(shí)驗(yàn)

開(kāi)展除菌性能檢測(cè)務(wù)必根據(jù)下列還原劑評(píng)定實(shí)驗(yàn)。

C3.1.1  試驗(yàn)分類

    1）染菌樣照 5mL PBS

2）染菌樣照 5mL 還原劑

3）染菌對(duì)相片 5mL 中和劑

4）樣片 5mL 中和劑 染菌對(duì)照片

5）染菌對(duì)照片 5mL PBS

6）同批號(hào)PBS

7）同批次中和劑

8）同批號(hào)培養(yǎng)基

C3.1.2  點(diǎn)評(píng)要求

1）第1組無(wú)實(shí)驗(yàn)菌，或僅有極個(gè)別實(shí)驗(yàn)菌菌體生長(zhǎng)發(fā)育。

2）第2組有較第1組為多，但較第3、4、5組為少的實(shí)驗(yàn)菌體生長(zhǎng)發(fā)育，并符合規(guī)定。

3）第3、4、5組有類似量實(shí)驗(yàn)菌生長(zhǎng)發(fā)育，并在1*10⁴-9*10⁴cfu/片中間，其小組之間菌體數(shù)誤差值應(yīng)不超過(guò)15%。

4）第6-8組無(wú)菌檢測(cè)生長(zhǎng)發(fā)育。

5）持續(xù)3次實(shí)驗(yàn)獲得達(dá)標(biāo)點(diǎn)評(píng)。

C3.2  除菌實(shí)驗(yàn)

C3.2.1  操作流程

將實(shí)驗(yàn)菌24h斜坡塑造物用PBS洗下，做成菌懸液（規(guī)定的含量為：用100uL滴于對(duì)比樣片上，回收利用菌數(shù)為1*10⁴-9*10⁴cfu/片）。

取被試樣片（2.0cm*3.0cm）和對(duì)仍然片（與試樣同質(zhì)性原材料，同樣尺寸，但沒(méi)有抗菌劑，且經(jīng)消毒解決）各4片，分為4組置于4個(gè)殺菌平皿內(nèi)。

取以上菌懸液，各自在每一個(gè)被試樣片和對(duì)仍然上面滴入100uL，勻稱施膠，逐漸記時(shí)，功效2、5、10、20min，用無(wú)菌檢測(cè)鑷各自將樣照資金投入含5mL相對(duì)應(yīng)還原劑的試管嬰兒內(nèi)，充足攪拌，作適度稀釋液，隨后取在其中2-3個(gè)稀釋液度，各自汲取0.5mL，置于2個(gè)平皿，用涼至40-45℃的營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液（病菌）或沙氏瓊脂培養(yǎng)液（酵母菌）15mL作竭盡，旋轉(zhuǎn)平皿，使其充足勻稱，瓊脂凝結(jié)后旋轉(zhuǎn)平板電腦，35℃±2℃塑造48h（病菌）或72h（酵母菌），干活兒菌菌落計(jì)數(shù)。

實(shí)驗(yàn)反復(fù)3次，按式（C1）測(cè)算除菌率：

           X₃ = （A-B）/A *100%    （C1)

式中：X₃――除菌率，%；

       A――對(duì)比試品均值菌體數(shù)；

       B――被使試品均值菌體數(shù)。

C3.2.2 點(diǎn)評(píng)規(guī)范

除菌率≥90%，商品有消菌。

C4  溶出物性抗（抑）菌商品抗菌特性實(shí)驗(yàn)方式

C4.1  操作流程

將實(shí)驗(yàn)菌24h斜坡塑造物用PBS洗下，做成菌懸液（規(guī)定的含量為：用100uL滴于對(duì)仍然上面或5mL樣液內(nèi)，回收利用菌數(shù)為1*10⁴-9*10⁴cfu/片或mL）。

取被試樣片（2.0cm*3.0cm）或樣液（5mL）和對(duì)仍然片或樣液（與試樣同質(zhì)性原材料，同樣尺寸，但沒(méi)有抗菌劑，且經(jīng)消毒解決）各4片（置于殺菌平皿內(nèi)）或4管。

取以上菌懸液，各自在每一個(gè)被試樣片或樣液和對(duì)仍然片或樣液上或內(nèi)滴加100uL，勻稱施膠/混和，逐漸記時(shí)，功效2、5、10、20min，用無(wú)菌檢測(cè)鑷各自將樣照或樣液（0.5mL）資金投入含5mL PBS的試管嬰兒內(nèi)，充足攪拌，作適度稀釋液，隨后取在其中2-3個(gè)稀釋液度，各自汲取0.5mL，置于2個(gè)平皿，用涼至40-45℃的營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液（病菌）或沙氏瓊脂培養(yǎng)液（酵母菌）15mL作竭盡，旋轉(zhuǎn)平皿，使其充足勻稱，瓊脂凝結(jié)后旋轉(zhuǎn)平板電腦，35℃±2℃塑造48h（病菌）或72h（酵母菌），干活兒菌菌落計(jì)數(shù)。

實(shí)驗(yàn)反復(fù)3次，按式（C2）測(cè)算抗菌率

          X₄ = ( A-B ) / A * 100    （C2)

式中：X₄――抑菌率，%；

   A――對(duì)比試品均值菌體數(shù)；

   B――被試樣品均值菌體數(shù)。

C4.2  點(diǎn)評(píng)規(guī)范

抗菌率≥50%-90%，商品有殺菌作用，抗菌率≥90%，商品有較強(qiáng)殺菌作用。

C5  非溶出性抗（抑）菌商品抗菌特性實(shí)驗(yàn)方式

C5.1  操作流程

稱量被試樣片（裁成1.0cm*1.0cm尺寸）0.75g散裝包好。

將0.75g重樣片放進(jìn)一個(gè)250mL的三角燒瓶中，各自添加70mL PBS和5mL菌懸液，使菌懸液在PBS中的含量為1*10⁴-9*10⁴cfu/ mL。

將三角燒瓶固定不動(dòng)于震蕩搖床邊，以300r/min振搖1h。

取0.5mL振搖后的樣液，或用PBS做適度稀釋液后的樣液，以瓊脂竭盡法注射培養(yǎng)皿，開(kāi)展菌落計(jì)數(shù)。

與此同時(shí)設(shè)對(duì)比樣片組和不用樣片組，對(duì)比樣片組的對(duì)照樣片與被試樣片一樣尺寸但沒(méi)有抑菌成份，別的操作流程均與被試樣片組同樣，不用樣片組各自取5mL菌懸液和70mL PBS添加一個(gè)250mL三角燒瓶中，攪拌，各自于0時(shí)間和震蕩1h后，各取0.5mL菌懸液與PBS的溶液做適度稀釋液，隨后開(kāi)展菌落計(jì)數(shù)。

實(shí)驗(yàn)反復(fù)3次，按式（C3）測(cè)算抗菌率：

     X₅ = （A ? B）/A * 100%       (C3)

式中： X₅――抑菌率，%；

        A――被試樣品震蕩前均值菌體數(shù)；

        B――被試樣品震蕩后均值菌體數(shù)。

C5.2  點(diǎn)評(píng)規(guī)范

不用樣片組的菌體數(shù)在1*10⁴-9*10⁴cfu/ mL中間，且試品振蕩前后左右均值菌落數(shù)差值在10%之內(nèi)，實(shí)驗(yàn)合理；被試樣片組抑菌率與對(duì)仍然片組抑菌率的差值＞26%，商品具備抗菌功效。

C6  穩(wěn)定性測(cè)試方式

C6.1  檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

C6.1.1  當(dāng)然備用：將原包裝試品置棚溫下最少1年，半年開(kāi)展抑菌或除菌性能指標(biāo)。

C6.1.2  加快實(shí)驗(yàn)：將原包裝試品置54-57℃恒溫箱內(nèi)14天或37-40℃恒溫箱內(nèi)3個(gè)月，維持空氣濕度＞75%，開(kāi)展抑菌或除菌性能指標(biāo)。

C6.2  點(diǎn)評(píng)規(guī)范

商品經(jīng)當(dāng)然備用，其除菌率或抑菌率做到附則C3或附錄C4、附則C5中要求的指標(biāo)值，商品的除菌或抑菌功效在棚溫下的維持時(shí)間即是當(dāng)然備用時(shí)間。

商品經(jīng)54℃加快實(shí)驗(yàn)，其除菌率或抑菌率做到附則C3或附錄C4、附則C5中要求的指標(biāo)值，商品的除菌或抑菌功效在棚溫下最少維持一年。

商品經(jīng)37℃加快實(shí)驗(yàn)，其除菌率或抑菌率做到附則C3或附錄C4、附則C5中要求的指標(biāo)值，商品的除菌或抑菌功效在棚溫下最少維持二年。

附則D

（規(guī)范的附則）

商品環(huán)氧乙烷殘余量測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)

D1  檢測(cè)目地

明確商品消毒殺菌后開(kāi)啟時(shí)間，當(dāng)新品或原料、消毒殺菌加工工藝更改很有可能影響到商品物理化學(xué)特性時(shí)應(yīng)予以檢測(cè)。

D2  試品收集

環(huán)氧乙烷消毒殺菌后，馬上從統(tǒng)一消毒殺菌生產(chǎn)批號(hào)的三個(gè)紙袋包裝中隨機(jī)抽取一定量小袋裝試品，取樣量最少應(yīng)達(dá)到要求所需測(cè)量頻次的量（留一定量在有必要時(shí)開(kāi)展進(jìn)行復(fù)測(cè)用）。

各自于環(huán)氧乙烷消毒殺菌后24h及之后每隔數(shù)日開(kāi)展殘留量測(cè)定，直至殘留量降至本規(guī)范4.6所要求的標(biāo)準(zhǔn)值下列。

D3  儀器設(shè)備與實(shí)際操作標(biāo)準(zhǔn)

儀器設(shè)備：氣相色譜、氫焰探測(cè)器（FID）

柱：Choromosorb 101 HP60-80目；夾層玻璃柱長(zhǎng)2m，Φ3nm。柱溫：120℃.

探測(cè)器：150℃。

汽化器：150℃。

載供氣量：氫氣：35mL/min。

         氡氣：35mL/min。

         氣體：350mL/min。

柱前壓約為108kPa。

D4.1  規(guī)范配置

用100mL夾層玻璃針管從純環(huán)氧乙烷小氣瓶中提取環(huán)氧乙烷標(biāo)準(zhǔn)氣體（反復(fù)放空自己二次，以清除原來(lái)氣體），塞外橡皮頭，用10mL針管提取以上100mL針管中純環(huán)氧乙烷標(biāo)準(zhǔn)氣體10mL，用氫氣稀釋液到100mL（可將10mL標(biāo)準(zhǔn)氣體引入到已經(jīng)有90mL氫氣的帶橡皮塞頭的針管中進(jìn)行）。用一樣的方式依據(jù)需用再逐步稀釋液2-3次（稀釋1000-10000倍），作三個(gè)濃度值的標(biāo)準(zhǔn)氣。按環(huán)氧乙烷小氣瓶中環(huán)氧乙烷的純凈度、稀釋倍數(shù)和棚溫測(cè)算出最終標(biāo)準(zhǔn)氣體中的環(huán)氧乙烷濃度值。

計(jì)算方法如下所示：

式中：c――標(biāo)準(zhǔn)氣濃度值，ug/mL；

       k――稀釋倍數(shù)；

       t――棚溫，℃。

D4.2  試品解決

最少取2個(gè)最小包裝商品，將其剪下來(lái)，任意精準(zhǔn)稱量2g，放進(jìn)提純器皿中，添加5mL去離子水，充足混勻，置放4h或震蕩30min備用。如被檢試品為吸水樹(shù)脂原材料商品，科適度提升去離子水量，以保證最少可吸出2mL樣液。

D4.3  剖析

待儀器設(shè)備平穩(wěn)后，在相同標(biāo)準(zhǔn)下，環(huán)氧乙烷標(biāo)準(zhǔn)氣各氣相1.0mL，待剖析試品（溶液）各氣相2uL，每一樣液平行面作2次測(cè)量。

依據(jù)保存期判定，依據(jù)峰總面積（或基線噪聲）開(kāi)展定量分析測(cè)算，取均值。

D4.4  測(cè)算

以所進(jìn)環(huán)氧乙烷標(biāo)準(zhǔn)氣體的mg（ug）數(shù)對(duì)所得的峰總面積（或基線噪聲）作環(huán)氧乙烷工作中曲線圖。

以試品中環(huán)氧乙烷相匹配的峰總面積（或基線噪聲）在工作中曲線圖上求取環(huán)氧乙烷的量A（ug），并且以式（D2）求取商品中環(huán)氧乙烷的殘余量。

式中：X――商品環(huán)氧乙烷殘余量，ug/g；

       A――從工作中曲線圖中常查得環(huán)氧乙烷量，ug；

       M――所取試品量，g；

V_（萃）――提取液容積，mL；

V_{（進(jìn)）}――進(jìn)樣量，mL。

附錄E

（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）

生產(chǎn)環(huán)境采樣與測(cè)試方法

E1  氣體采樣與測(cè)試方法

E1.1  試品收集

在信息下開(kāi)展。

棚里總面積不超過(guò)30m²，在對(duì)角里設(shè)里、中、外三點(diǎn)，里、外點(diǎn)部位離墻1m；棚里總面積超出30m²，設(shè)東、西、南、北、中5點(diǎn)，周邊4點(diǎn)距墻1m。

采樣時(shí)，將含營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液的平板電腦（直徑9cm）置采樣點(diǎn)（約桌面上相對(duì)高度），開(kāi)啟培養(yǎng)皿蓋，使平板電腦在空氣中曝露5min。

E1.2  細(xì)菌檢查

在采樣前將準(zhǔn)備好的營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液置35℃±2℃塑造24h，取下查驗(yàn)有零污染，將環(huán)境污染培養(yǎng)液去除。

將已收集的培養(yǎng)液在6h內(nèi)送試驗(yàn)棚，于35℃±2℃塑造48h觀查結(jié)果，記數(shù)平板電腦上細(xì)菌菌落數(shù)。

E1.3  菌體測(cè)算

 式中：y₁――空氣中細(xì)菌菌落數(shù)量，cfu/m³；

        A――平板電腦上均值細(xì)菌菌落數(shù)；

        S₁――平板電腦總面積，cm²；

         t――暴露時(shí)間，min。

E2  操作臺(tái)表層與職工手表層取樣與測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)

E2.1  試品收集

操作臺(tái)：將經(jīng)殺菌的公稱直徑為5cm*5cm的殺菌規(guī)格型號(hào)板放到被檢物件表層，用一浸有殺菌鹽水的棉球在其中擦抹10次，隨后剪去手觸碰一部分棉簽，將棉球放進(jìn)含10mL殺菌鹽水的取樣管中復(fù)檢。

E2.2  病菌菌落總數(shù)檢測(cè)

將已收集的樣本在6h內(nèi)送試驗(yàn)棚，每一個(gè)取樣管充足攪拌后取1mL樣液，放進(jìn)殺菌培養(yǎng)皿內(nèi)，竭盡營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液，每一個(gè)試品平行面注射二塊培養(yǎng)皿，置35℃±2℃塑造48h觀查結(jié)果，記數(shù)平板電腦上細(xì)菌菌落數(shù)。

式中：y₂――操作臺(tái)表層細(xì)菌菌落數(shù)量，cfu/cm²；

       A――平板電腦上均值細(xì)菌菌落數(shù)；

      S₂――取樣總面積，cm²；

      y₃――職工手表層細(xì)菌菌落數(shù)量，cfu/支手。

E2.3  致病菌檢測(cè)

按本規(guī)范附則B開(kāi)展。

附則F

（規(guī)范的附則）

消毒殺菌實(shí)際效果微生物檢測(cè)評(píng)價(jià)方法

F1  環(huán)氧乙烷消毒殺菌

F1.1  環(huán)氧乙烷消毒殺菌實(shí)際效果點(diǎn)評(píng)用微生物指示菌為枯草桿菌灰黑色變異芽胞（ATCC 9372）。在菌量為5*10⁵-5*10⁶cfu/片、環(huán)氧乙烷濃度值為600mg/L±30mg/L、功效溫度為54℃±2℃、空氣濕度為60%±10%標(biāo)準(zhǔn)下，其消滅90%微生物所需時(shí)間D值應(yīng)是2.5-5.8min，生存時(shí)間≥7.5min，消滅時(shí)間≤58min。

F1.2  每一次檢測(cè)最少布線10片生物指示劑，放于較難消滅處。消毒殺菌結(jié)束，取下指示菌片注射鷹眼俠骨頭湯栽培基質(zhì)作判定檢驗(yàn)或注射營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液作定量分析檢驗(yàn)，將沒(méi)有處理陽(yáng)性對(duì)照菌片作同樣注射，二者均置35℃±2℃塑造。陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)在24h內(nèi)有菌生長(zhǎng)發(fā)育。判定塑造試品如持續(xù)觀查7天所有無(wú)菌檢測(cè)生長(zhǎng)發(fā)育，可匯報(bào)生物指示劑塑造呈陰性，消毒殺菌達(dá)標(biāo)。定量分析塑造試品與陽(yáng)性對(duì)照對(duì)比消滅指數(shù)值做到10³也可匯報(bào)消毒殺菌達(dá)標(biāo)。

F2  電磁波輻射消毒殺菌

F2.1  電磁波輻射消毒殺菌實(shí)際效果點(diǎn)評(píng) 用微生物指示菌為簡(jiǎn)短鏈球菌芽胞E601（ATCC 27142），在菌量為5*10⁵-5*10⁶cfu/口腔上皮細(xì)胞，其消滅90%微生物所需使用量D₁₀值應(yīng)是1.7kGy。

F2.2  每一次檢測(cè)最少選5箱，每件商品布線3片生物指示劑，置最少使用量處。消毒殺菌結(jié)束，取下指示菌片注射營(yíng)養(yǎng)成分骨頭湯栽培基質(zhì)作判定檢驗(yàn)或注射營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液作定量分析檢驗(yàn)，將沒(méi)有處理陽(yáng)性對(duì)照菌片作同樣注射，二者均置35℃±2℃塑造。陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)在24h內(nèi)有菌生長(zhǎng)發(fā)育。判定塑造試品如持續(xù)觀查7天所有無(wú)菌檢測(cè)生長(zhǎng)發(fā)育，可匯報(bào)生物指示劑塑造呈陰性，消毒殺菌達(dá)標(biāo)。定量分析塑造試品與陽(yáng)性對(duì)照對(duì)比消滅指數(shù)值做到10³也可匯報(bào)消毒殺菌達(dá)標(biāo)。

F3  工作壓力蒸汽消毒

參考GB15981-1995的要求實(shí)行。

附則G

（規(guī)范的附則）

培養(yǎng)液與具體制取

G1  營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液

成份：

  蛋白胨                            10g

  牛肉膏                             3g

  氧化鈉                             5g

  瓊脂                              15g-20g

  純凈水                            1000mL

制作方法：除瓊脂外別的成份融解于純凈水中，調(diào)pH至7.2-7.4，添加瓊脂，加溫融解，散裝試管嬰兒，121℃殺菌15min儲(chǔ)備用。

G2  乳清蛋白膽鹽發(fā)醇管

成份：

  蛋白胨                            20g

  豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）             5g

  乳清蛋白                              10g

      0.04%溴甲酚紫溶液               25mL

  純凈水                            加至1000mL

制作方法：將蛋白胨、膽鹽及乳清蛋白溶解水里，校準(zhǔn)pH至7.4，添加顯色劑，散裝沒(méi)管50mL，并放進(jìn)一個(gè)小倒管，115℃殺菌15min，即得。

G3  乳清蛋白發(fā)醇管

成份：

  蛋白胨                            20g

  乳清蛋白                              10g

      0.04%溴甲酚紫溶液               25mL

  純凈水                            加至1000mL

制作方法：將蛋白胨及乳清蛋白溶解水里，校準(zhǔn)pH至7.4，添加顯色劑，散裝每管10mL，并放進(jìn)一個(gè)小倒管，115℃殺菌15min，即得。

G4  伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB）

成份：

  蛋白胨                            10g

  乳清蛋白                              10g

      磷酸氫二鉀                         2g

      瓊脂                              17g

      2%伊紅Y飽和溶液                      20mL

0.65%美藍(lán)溶液                     10mL

  純凈水                            加至1000mL

制作方法：將蛋白胨、聚磷酸鹽和瓊脂融解于純凈水中，校準(zhǔn)pH至7.1，散裝與圓底燒瓶?jī)?nèi)，121℃殺菌15min預(yù)留，臨用時(shí)添加乳清蛋白并加溫融化瓊脂，冷至55℃，添加伊紅和美藍(lán)飽和溶液混勻，竭盡平板電腦。

G5  SCDLP 液體培養(yǎng)基

成份：

 opo結(jié)構(gòu)脂胨                           17 g

 黃豆蛋白胨                          3 g

 氧化鈉                              5 g

 磷酸氫二鉀                        2.5 g

 葡萄糖水                            2.5 g

大豆卵磷脂                              1 g

 司盤80                              7 g

 純凈水                            1000 mL

制作方法：將各種各樣成份混和(如無(wú)opo結(jié)構(gòu)脂胨和黃豆蛋白胨可以用日本多胨替代)，加溫融解，調(diào)pH至7.2～7.3，散裝，121℃殺菌20min，混勻，防止司盤80沉到底端，冷至25℃后應(yīng)用。

G6  十六烷三丙基溴化銨培養(yǎng)液

成份：

牛肉膏                              3 g

  蛋白胨                             10 g

  氧化鈉                              5 g

  十六烷三羥基溴銨                  0.3 g

  瓊脂                               20 g

  純凈水                           1000 mL

制作方法：除瓊脂外，以上各成份混和加溫融解，調(diào)pH至7.4～7.6，隨后添加瓊脂，115℃殺菌20 min，冷至55℃上下竭盡培養(yǎng)皿。

G7  綠膿菌素測(cè)量用培養(yǎng)液斜坡

成份：

  蛋白胨                             20 g

  氧化鎂                            1.4 g

  硫酸銨                             10 g

  瓊脂                               18 g

  凡士林(化學(xué)純)                       10g

  純凈水                          加至1 000 mL

制作方法：將蛋白胨、氧化鎂和硫酸銨加到純凈水中，加溫融解，調(diào)pH至7.4，添加瓊脂和凡士林，加溫融解，散裝試管嬰兒，115℃殺菌20 min，做成斜坡預(yù)留。G8  果膠培養(yǎng)液

成份：

  牛肉膏                              3 g

  蛋白胨                              5 g

  果膠                               120 g

  純凈水                             1 000 mL

制作方法：各成份添加純凈水中泡浸20 min，加溫混合融解，調(diào)pH至7.4，5 mL散裝試管嬰兒中，115℃ 殺菌20 min，站立做成高層住宅預(yù)留。

G9  磷酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)液

成份：

  蛋白胨                             10 g

  酵母浸膏                            3 g

  硝酸鉀                              2 g

  亞硝酸鈉                          0.5 g

  純凈水                            1000 mL

制作方法：將蛋白胨與酵母浸膏加到純凈水中，加溫融解，調(diào)pH至7.2，燒開(kāi)過(guò)慮后補(bǔ)充水率，添加硝酸鉀和亞硝酸鈉融解勻稱，散裝到有小倒管的試管嬰兒中，115℃殺菌20 min備用。

G10  血瓊脂培養(yǎng)液

成份：

營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂                           100 mL

  脫纖維羊血(或兔血)                  10 mL

制作方法：將殺菌后的營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂加溫融化，涼至55℃上下，用無(wú)菌檢測(cè)方式將10 mL脫化學(xué)纖維血添加后混勻，竭盡培養(yǎng)皿置電冰箱備用。

G11  甘油果糖發(fā)醇培養(yǎng)液

成份：

  蛋白胨                             10 g

  牛肉膏                              5 g

  氧化鈉                              5 g

  甘油果糖                             10 g

 0.2％溴麝香草酚藍(lán)飽和溶液              12 mL

純凈水                            1000 mL

 制作方法：將蛋白胨、氧化鈉、牛肉膏加到純凈水中，加溫融解，調(diào)pH至7.4，添加甘油果糖和溴麝香草酚藍(lán)攪拌后，散裝試管嬰兒，115℃殺菌20 min備用。

G12  葡萄糖肉湯

成分：

　蛋白胨                             10 g

  牛肉膏                              5 g

  氧化鈉                              5 g

  葡萄糖                             10 g

純凈水                            1000 mL

制作方法：以上成分溶解純凈水中，調(diào)pH至7.2～7.4，加溫融解，散裝試管嬰兒，121℃殺菌15min儲(chǔ)備用。

G13  兔血液

制作方法：取殺菌3.8％三聚磷酸鈉1份，兔全血4份，攪拌靜放，3 000 r/min離心式5 min，取上清，棄血球。

G14  沙氏瓊脂培養(yǎng)液

  蛋白胨                             10 g

  葡萄糖                             40g

  瓊脂                               20g

純凈水                            1000 mL

用700 mL蒸餾水將瓊脂融解，300 mL純凈水將葡萄糖水與蛋白胨融解，混和以上兩一部分，混勻后散裝，115℃殺菌15 min，即得。應(yīng)用前，用過(guò)濾除菌方式添加0.1g/L的氯霉素或是0.03g/L的氨芐青霉素。

判定實(shí)驗(yàn)選用沙氏栽培基質(zhì)，即除不用瓊脂外別的成份與制作方法跟上面一樣。

G15  營(yíng)養(yǎng)成分骨頭湯栽培基質(zhì)

  蛋白胨                             10 g

  氧化鈉                              5 g

  牛肉膏                              3 g

純凈水                            1000 mL

調(diào)整pH使殺菌后為7.2～7.4，散裝，115℃殺菌30 min，即得。

G16  溴甲酚紫葡萄糖水蛋白胨水培養(yǎng)液

  蛋白胨                             10 g

  葡萄糖水                               5g

純凈水                            1000 mL

調(diào)整pH至7.0～7.2，加2％溴甲酚紫酒精溶液0.6 mL，115℃ 殺菌30 min，即得。

G17  革蘭氏染色液

結(jié)晶紫上色液：

結(jié)晶紫                              1 g

 95％乙酸乙酯                           20 mL

  1％草酸銨溶液                    80 mL

將結(jié)晶紫融解于乙酸乙酯中，隨后與草酸銨飽和溶液混和。

革蘭氏陽(yáng)性菌碘液：

結(jié)晶紫                              1 g

碘                                  1 g

  碘酸鉀                              2 g

  純凈水                             300 mL

脫色劑

95％乙酸乙酯

復(fù)染液：

(1)沙黃復(fù)染液：

沙黃                               0.25 g

  95％乙酸乙酯                            10 mL

純凈水                              90 mL

將沙黃融解于乙酸乙酯中，隨后用純凈水稀釋液。

(2)稀石炭酸復(fù)紅液

稱量偏堿復(fù)紅10g，研細(xì)，加95％乙酸乙酯100mL，置放留宿，過(guò)濾紙過(guò)慮。取該液10mL，加5％石炭酸溶液90mL混和，即是石炭酸復(fù)紅液。再取此液10mL，放水90mL，即是稀石炭酸復(fù)紅液。

G18  0.03 mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.2）

成份：

磷酸氫二鈉                       2.83 g

  磷酸二氫鉀                       1.36 g

 純凈水                           1000 mL

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